搖瓶機(jī)培養(yǎng)方法在浸沒培養(yǎng)過程中振蕩的目的在于改善活細(xì)胞的氧氣和營養(yǎng)物的供給。培養(yǎng)通常以特定生長條件下的培養(yǎng)物接種,也可用孢子接種。在絕大多數(shù)情況下,接種量有一較佳濃度,此在開始之前,須通過預(yù)試加以確定。而在整個搖瓶發(fā)酵過程中保持相對無菌是成功地實(shí)施這項(xiàng)技術(shù)的必要保證。
搖瓶機(jī)培養(yǎng)的機(jī)械裝置主要由用于放置和固定燒瓶的平臺以及牽引其運(yùn)轉(zhuǎn)的馬達(dá)和運(yùn)轉(zhuǎn)系統(tǒng)組成,需安裝于有維持恒溫和恒濕自動調(diào)節(jié)能力的隔熱室內(nèi)。
目前也有具備恒溫裝置的小型臺式搖床。
搖床的設(shè)計(jì)和使用性能主要從下列幾項(xiàng)入手:(1)所使用的設(shè)備,(2)平衡要求,(3)搖床的大小、型號,(4)培養(yǎng)條件及恒溫調(diào)控,(5)試管或小型發(fā)酵器的振蕩培養(yǎng)性能。
搖瓶機(jī)細(xì)菌培養(yǎng)試驗(yàn)步驟:
1、復(fù)蘇:根據(jù)所培養(yǎng)的細(xì)菌選擇適宜的培養(yǎng)基,大部分細(xì)菌在LB培養(yǎng)基中在超凈工作臺先用1毫升左右的適宜的培養(yǎng)基溶解冷凍菌,然后轉(zhuǎn)移到10毫升中試管(放入4毫升液體培養(yǎng)基)中,一般在37攝氏度搖床靜止或低轉(zhuǎn)速培養(yǎng)12小時(shí)或者過夜(溫度取決于所培養(yǎng)的細(xì)菌適宜生長的溫度)。
2、平板劃線培養(yǎng):在平板(瓊脂+液體培養(yǎng)基)劃線,放37攝氏度培養(yǎng)箱培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)6小時(shí)~12小時(shí),在平板上觀察是否形成了單菌落.
3、挑單菌落:在超凈臺中挑選典型單菌落,置入10毫升中試管(內(nèi)有5毫升液體培養(yǎng)基)中,在37攝氏度搖床,轉(zhuǎn)速200轉(zhuǎn)培養(yǎng)12小時(shí)或者過夜,肉眼能看到試管渾濁。
4、按照1:20的比例將中試管中的菌液移到250毫升三角瓶,培養(yǎng)條件同前。